【佳學(xué)基因-基因檢測(cè)】實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)簡(jiǎn)介與應(yīng)用
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗(yàn)技術(shù),被廣泛應(yīng)用到生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域, 不僅涉及到對(duì)DNA的定量, 核酸多態(tài)性分析, 基因突變分析等,同時(shí)對(duì)染色體病的診斷、基因病的診斷、腫瘤研究以及用藥評(píng)估方面都有廣泛應(yīng)用。腫瘤基因檢測(cè)哪里做?
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有很多優(yōu)點(diǎn),例如特異性好、正確性高、靈敏度高、可定量檢測(cè)、 誤差小、操作簡(jiǎn)單、自動(dòng)化程度高、交叉污染和污染環(huán)境機(jī)會(huì)少等。 同時(shí)因不需雜交、電泳、凝膠成像。此外, 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在動(dòng)物檢疫和環(huán)境監(jiān)測(cè)等方面也得到了廣泛的應(yīng)用, 使人們的健康得到保障, 同時(shí), 也可使人們深入探索微生物群落與環(huán)境因子之間的相互作用及其動(dòng)態(tài)變化過程。腫瘤基因檢測(cè)哪里做?
實(shí)時(shí)熒光定量PCR 包括探針類和染料類兩種,探針類是利用與靶序列特異雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加, 染料類如SYBR Green I 則是利用與雙鏈DNA 小溝結(jié)合發(fā)光的理化特征指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加對(duì)病原DNA 的檢測(cè)。Taqman探針法是高度特異的定量PCR技術(shù),其核心是利用taq酶的3’-5’外切核酸酶活性,切斷探針,產(chǎn)生熒光信號(hào)。由于探針和模板是特異性結(jié)合,所以熒光信號(hào)的強(qiáng)弱就代表了模板的數(shù)量。
針對(duì)遺傳病的基因突變,設(shè)計(jì)跨越突變位點(diǎn)的熒光探針,對(duì)跨越突變位點(diǎn)的一段基因進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增結(jié)束時(shí),對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行緩慢加熱以獲得熔解曲線,根據(jù)熔解曲線判斷是否有基因突變。腫瘤基因檢測(cè)哪里做?
對(duì)某種基因型疾病實(shí)施藥物治療后,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 對(duì)相關(guān)基因是否轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄量的多少均可以快速正確的監(jiān)控,對(duì)臨床有重要指導(dǎo)意義。
癌基因的表達(dá)增加和突變?cè)谠S多腫瘤早期和良性階段就會(huì)出現(xiàn), 實(shí)時(shí)熒光定量PCR不但能有效地檢測(cè)基因的突變,而且能正確測(cè)定表達(dá)量,據(jù)此可進(jìn)行腫瘤早期診斷、分型、分期和預(yù)后判斷。
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