【佳學(xué)基因檢測】CRISPR/CAS9基因編輯系統(tǒng)糾正了因子XIII缺陷最常見的致病突變

常染色體隱性與顯性基因遺傳病基因檢測查找疾病原因的分子診斷

根據(jù)試管嬰兒成功的關(guān)鍵是什么：基因檢測與早期診斷，國際著名基因檢測科學(xué)性證據(jù)雜志《Blood Coagul Fibrinolysis》在第.?2022 Apr 1;33(3):153-158.期發(fā)表了一篇標(biāo)題為《CRISPR/CAS9基因編輯系統(tǒng)糾正了因子XIII缺陷最常見的致病突變》的基因密碼破解碼分析文章。該基因領(lǐng)域的臨床應(yīng)用研究由Akbar Dorgalaleh,?Jafar Kiani,?Farhad Zaker?,?Majid Safa?完成。

基因信息數(shù)據(jù)庫索引號：

基因檢測數(shù)據(jù)庫代碼：?35221320和?doi: 10.1097/MBC.0000000000001126.?Epub 2022 Feb 25.

基因解碼研究關(guān)鍵詞：

因子XIII缺乏,出血障礙,臍帶出血,顱內(nèi)出血,反復(fù)性流產(chǎn)

國際基因解碼證據(jù)鏈條標(biāo)簽：

Keywords:Factor XIII deficiency,bleeding disorders, umbilical cord bleeding, intracranial haemorrhage,recurrent miscarriages

基因檢測臨床研究與應(yīng)用結(jié)果介紹：

因子XIII（FXIII）缺乏是最嚴(yán)重的先天性出血性疾病之一，估計(jì)發(fā)病率為百萬分之一。嚴(yán)重FXIII缺乏癥患者表現(xiàn)出廣泛的臨床表現(xiàn)，包括臍帶出血、顱內(nèi)出血和反復(fù)流產(chǎn)。由于危及生命的出血率很高，從診斷時(shí)起就必須進(jìn)行初級預(yù)防。雖然替代治療是最常見的治療選擇，但基因治療仍是唯一的治療選擇。在本研究中，我們評估了聚集的規(guī)則間隔短回文重復(fù)序列-CRISPR相關(guān)蛋白9（CRISPR/Cas9）系統(tǒng)在糾正最常見的FXIII致病突變（c.562 T>c）方面的功效。從一名FXIII缺乏的年輕患者的皮膚活檢中獲取皮膚成纖維細(xì)胞。Sanger測序用于確認(rèn)患者和收獲的成纖維細(xì)胞中是否存在c.562 T>c突變。用BbsI限制性內(nèi)切酶消化PX459載體，在退火和連接兩個(gè)接近PAM（NGG）序列的20 bp引導(dǎo)RNA（g-RNAs）后，在大腸桿菌Top 10中擴(kuò)增構(gòu)建的載體。通過核子轉(zhuǎn)染裝置進(jìn)行轉(zhuǎn)染，在嘌呤霉素選擇和潛在轉(zhuǎn)染菌落的連續(xù)稀釋后進(jìn)行DNA提取。使用一個(gè)50 bp的模板寡核苷酸來幫助同源修復(fù)，以糾正潛在突變和同義突變，作為內(nèi)部對照。突變位點(diǎn)附近的同義突變（AAT-ACT）被用作內(nèi)部對照。桑格測序是為了檢查基因的正確性。在患者的原代成纖維細(xì)胞中檢測到純合狀態(tài)的c.562 T>c突變，在正常個(gè)體中確認(rèn)了野生型等位基因?？寺CR和測序顯示設(shè)計(jì)的gRNAs克隆成功。在患者的轉(zhuǎn)染皮膚成纖維細(xì)胞中，檢測到的突變從純合子突變狀態(tài)（c.562 T>c）糾正為純合子野生型。作為內(nèi)部對照，對照突變也以雜合子方式在相同的成纖維細(xì)胞中得到糾正。研究結(jié)果表明，CRISPR/CAS9基因編輯系統(tǒng)是糾正先天性FXIII缺陷患者轉(zhuǎn)染的成纖維細(xì)胞中點(diǎn)突變的有效工具，代表了一種新的、潛在的治療選擇。

 罕見病-苯丙酮尿癥

 

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