【佳學基因檢測】CRISPR/CAS9基因編輯系統(tǒng)糾正了因子XIII缺陷賊常見的致病突變

常染色體隱性與顯性基因遺傳病基因檢測查找疾病原因的分子診斷

根據試管嬰兒成功的關鍵是什么：基因檢測與早期診斷，國際有很高知名度基因檢測科學性證據雜志《Blood Coagul Fibrinolysis》在第.?2022 Apr 1;33(3):153-158.期發(fā)表了一篇標題為《CRISPR/CAS9基因編輯系統(tǒng)糾正了因子XIII缺陷賊常見的致病突變》的基因密碼破解碼分析文章。該基因領域的臨床應用研究由Akbar Dorgalaleh,?Jafar Kiani,?Farhad Zaker?,?Majid Safa?完成。

基因信息數(shù)據庫索引號：

基因檢測數(shù)據庫代碼：?35221320和?doi: 10.1097/MBC.0000000000001126.?Epub 2022 Feb 25.

基因解碼研究關鍵詞：

因子XIII缺乏,出血障礙,臍帶出血,顱內出血,反復性流產

國際基因解碼證據鏈條標簽：

Keywords:Factor XIII deficiency,bleeding disorders, umbilical cord bleeding, intracranial haemorrhage,recurrent miscarriages

基因檢測臨床研究與應用結果介紹：

因子XIII（FXIII）缺乏是賊嚴重的先天性出血性疾病之一，估計發(fā)病率為百萬分之一。嚴重FXIII缺乏癥患者表現(xiàn)出廣泛的臨床表現(xiàn)，包括臍帶出血、顱內出血和反復流產。由于危及生命的出血率很高，從診斷時起就必須進行初級預防。雖然替代治療是賊常見的治療選擇，但基因治療仍是少有的治療選擇。在本研究中，我們評估了聚集的規(guī)則間隔短回文重復序列-CRISPR相關蛋白9（CRISPR/Cas9）系統(tǒng)在糾正賊常見的FXIII致病突變（c.562 T>c）方面的功效。從一名FXIII缺乏的年輕患者的皮膚活檢中獲取皮膚成纖維細胞。Sanger測序用于確認患者和收獲的成纖維細胞中是否存在c.562 T>c突變。用BbsI限制性內切酶消化PX459載體，在退火和連接兩個接近PAM（NGG）序列的20 bp引導RNA（g-RNAs）后，在大腸桿菌Top 10中擴增構建的載體。通過核子轉染裝置進行轉染，在嘌呤霉素選擇和潛在轉染菌落的連續(xù)稀釋后進行DNA提取。使用一個50 bp的模板寡核苷酸來幫助同源修復，以糾正潛在突變和同義突變，作為內部對照。突變位點附近的同義突變（AAT-ACT）被用作內部對照。桑格測序是為了檢查基因的正確性。在患者的原代成纖維細胞中檢測到純合狀態(tài)的c.562 T>c突變，在正常個體中確認了野生型等位基因?？寺CR和測序顯示設計的gRNAs克隆成功。在患者的轉染皮膚成纖維細胞中，檢測到的突變從純合子突變狀態(tài)（c.562 T>c）糾正為純合子野生型。作為內部對照，對照突變也以雜合子方式在相同的成纖維細胞中得到糾正。研究結果表明，CRISPR/CAS9基因編輯系統(tǒng)是糾正先天性FXIII缺陷患者轉染的成纖維細胞中點突變的有效工具，代表了一種新的、潛在的治療選擇。

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